對于
抗體制備有了質(zhì)量好的抗原,還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩剑拍墚a(chǎn)生質(zhì)量好(特異性強(qiáng)和效價高)的抗體。
在免疫期間,不僅各個不同的動物,而且同一動物在不同的時間內(nèi)抗血清效價、特異性、親協(xié)力等都可能發(fā)生變化,因而必須經(jīng)常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親協(xié)力等方面作*的評價后,才可使用所取得的抗血清。
抗體制備抗血清的特異性測定:
抗血清的特異性或稱專一性是指抗血清對相應(yīng)的抗原及近似的抗原物質(zhì)的識別能力。特異性好就是抗血清的識別能力強(qiáng)。通常,特異性是以交叉反應(yīng)率來表示的。交叉反應(yīng)率低,表示抗血清的特異性好,反之則特異性差。交叉反應(yīng)率一般是用競爭抑制曲線來判定的。以不同濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率(B/T或B/B0),求出各IC50時的濃度,按下列公式計算交叉反應(yīng)率。
S=y/Z×100%;
S-交叉反應(yīng)率,y-IC50時抗原濃度,Z-IC50時近似抗原物質(zhì)的濃度。
如某抗原的IC50濃度為90Pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)IC50濃度幾乎是無窮大,可以說這一抗血清與其它抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似零,即無交叉反應(yīng),該抗血清的特異性是好的。
免疫細(xì)胞化學(xué)的技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強(qiáng)、親協(xié)力大、滴度高的特異性抗體,由于每種抗原都有幾個抗原決定簇,用它免疫動物將產(chǎn)生對各個決定簇的抗體,即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而形成的雜交廇細(xì)胞經(jīng)無性繁殖而來的細(xì)胞群所產(chǎn)生的,所以它的免疫球蛋白屬同一類型,質(zhì)地純一,而且它是針對某一抗原決定簇的,因此特異性強(qiáng),親合性也一致。