蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過(guò)這個(gè)體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。
蛋白表達(dá)一般由以下幾個(gè)部分組成:
1.宿主:表達(dá)蛋白的生物體。可以為細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同,適合表達(dá)蛋白的種類(lèi)也不相同;
2.載體:載體的種類(lèi)與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同,分為原核(細(xì)菌)表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體、昆蟲(chóng)表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過(guò)載體介導(dǎo),外源基因可以在宿主中表達(dá);
3.輔助成分:有的表達(dá)系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進(jìn)入宿主的輔助成分。比如昆蟲(chóng)-桿狀病毒表達(dá)體系中的桿狀病毒。
對(duì)于一個(gè)蛋白來(lái)說(shuō):
首先了解該蛋白的基本信息,獲得序列信息,了解構(gòu)成情況。
然后再對(duì)蛋白序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析:
1.是否含有稀有密碼子;
2.是否有二硫鍵;
3.是否含有信號(hào)肽;
4.磷酸化和糖基化位點(diǎn)。
再構(gòu)建載體在不同的菌株中表達(dá),同時(shí)嘗試不同的誘導(dǎo)條件,包括:誘導(dǎo)時(shí)OD值、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時(shí)間、分析表達(dá)結(jié)果。同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)作圖,觀察目的蛋白對(duì)宿主菌是否有毒害作用。通過(guò)終的表達(dá)結(jié)果分析過(guò)程。