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轉染、轉化、轉導你還在傻傻分不清?

更新時間:2021-08-26點擊次數(shù):6679

一、什么是轉染?

轉染(transfection)是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

常規(guī)轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩(wěn)定轉染(永jiu轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說,超螺旋質粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時內(依賴于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩(wěn)定轉染的同源細胞系。
轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優(yōu)化DNA與轉染試劑比例,細胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時間等。


2、轉化

轉化(transformation)是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應變化的現(xiàn)象。
該現(xiàn)象首先發(fā)現(xiàn)于細菌。也是細菌間遺傳物質轉移的多種形式中最早發(fā)現(xiàn)的一種,它不同于通過噬菌體感染傳遞遺傳物質的轉導以及通過細菌細胞的接觸而轉移DNA的細菌接合。


3、轉導

轉導(transduction)由噬菌體將一個細胞的基因傳遞給另一細胞的過程。它是細菌之間傳遞遺傳物質的方式之一。其具體含義是指一個細胞的DNA或RNA通過病毒載體的感染轉移到另一個細胞中。

 

轉染 轉化 轉導區(qū)別:

1、作用不同

轉化是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應變化的現(xiàn)象。

轉導由噬菌體將一個細胞的基因傳遞給另一細胞的過程。

轉染是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。

2、特點不同

轉化是細菌間遺傳物質轉移的多種形式中最早發(fā)現(xiàn)的一種,它不同于通過噬菌體感染傳遞遺傳物質的轉導以及通過細菌細胞的接觸而轉移DNA的細菌接合。

轉導是細菌之間傳遞遺傳物質的方式之一。其具體含義是指一個細胞的DNA或RNA通過病毒載體的感染轉移到另一個細胞中。

轉染關鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進入細胞內部。

3、功能不同

轉化的研究不但在理論上有重要意義,而且在基因工程中是將質粒或病毒載體引入宿主細胞的一種重要手段。它也可能為育種和遺傳性疾病的基因治療提供新的途徑。

應用轉導是細菌的遺傳學研究中的一種常用研究手段。它可以用來在細菌間轉移基因,進行互補測驗,進行基因定位,特別是通過共轉導方法進行基因的精細結構分析。

轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要優(yōu)化DNA與轉染試劑比例,細胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時間等。




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