技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES您是否有過這樣的經(jīng)歷……
新買到的細胞或者實驗室傳了幾代的細胞,又或者是儲存于超低溫冰箱幾年不用的細胞, 需要用到時腦海里一直有著這樣的問題困擾著你,被污染了么? 鑒定正確么?用它做研究會影響實驗結(jié)果么?
據(jù)統(tǒng)計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,只因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導(dǎo)致研究結(jié)論錯誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細胞治療災(zāi)難性后果……,這將浪費大量時間、精力和金錢。
為什么要進行細胞系鑒定?
進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細胞來進行,這些細胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細胞庫(如美國?ATCC,American?Type?Culture?Collection)得來。據(jù)估計,15-20%的實驗室,實驗中所使用的細胞已經(jīng)不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發(fā)生了交叉污染。顯然,細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大的威脅著基于這些細胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。
什么細胞最容易污染別的細胞?
Hela 細胞。五十多年來,Hela細胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究,對當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功,是名副其實的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時很多被廣泛研究的細胞系都被Hela細胞淹沒,因為它長得快,當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細胞突然長得很好,而以后都用它傳代做實驗的話,十之八九是搞錯了。
什么情況下需要細胞系鑒定?
1)當(dāng)建立或獲得一個新的細胞系時;
2)一個涉及到細胞試驗項目開始/結(jié)束時;
3)在細胞凍存之前,或細胞已連續(xù)培養(yǎng) 2~3 個月時;
4)發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前;
5)細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時;
6)當(dāng)實驗室使用超過一種細胞系時,所有細胞系最好先鑒定以排除交叉污染的可能;
如何根據(jù)STR數(shù)據(jù)判斷細胞系身份?
收到細胞系鑒定結(jié)果以及 STR 信息,可以與參考數(shù)據(jù)庫進行比對。如果細胞樣本的每個 STR 位點和參考細胞 STR 位點都能重合匹配,即說明該細胞系正確,反之則說明你的細胞系可能被錯誤標記,交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來,匹配度≥80%即可認為該細胞系正確,匹配度<80%則說明該細胞系的來源需要被懷疑。
如果細胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯誤標記,則需要拿更早代數(shù)的細胞進行鑒定,從而找到問題的起源或者直接從可靠的機構(gòu)購買一株新的細胞系。
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