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重組IgG制備

更新時(shí)間:2021-12-13點(diǎn)擊次數(shù):815

隨著重組蛋白技術(shù)的進(jìn)一步完善,真核哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)憑著蛋白折疊和完善的翻譯后休息系統(tǒng),表達(dá)的抗體更接近天然構(gòu)象,從而具有和天然抗體相同的生物活性,因此常用于功能蛋白、抗體及臨床疫苗的生產(chǎn)。艾柏森生物提供工業(yè)級(jí)別重組IgG、Fab和ScFv等抗體片段的制備和純化服務(wù)。

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(transienttransfection)是將重組抗體基因?qū)胝婧思?xì)胞的方式之一。在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中,重組DNA導(dǎo)入感染性強(qiáng)的細(xì)胞系以獲得目的基因暫時(shí)但高水平的表達(dá)。轉(zhuǎn)染的DNA不必整合到宿主染色體,可在比穩(wěn)定轉(zhuǎn)染較短時(shí)間內(nèi)收獲轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,并對(duì)溶解產(chǎn)物中目的基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。艾柏森提供從基因優(yōu)化、載體構(gòu)建、瞬轉(zhuǎn)HEK293細(xì)胞/CHO細(xì)胞、表達(dá)純化小試以及大規(guī)模發(fā)酵服務(wù)??梢远虝r(shí)間內(nèi)生產(chǎn)mg至g級(jí)重組IgG。

構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系

構(gòu)建目的基因的表達(dá)質(zhì)粒后,可通過電轉(zhuǎn)、慢病毒轉(zhuǎn)染等方法,將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞。選用DHFR /GS基因表達(dá)系統(tǒng),將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)在合適的選擇性培養(yǎng)基中,然后進(jìn)行MTX/MSX壓力篩選,以產(chǎn)生穩(wěn)定細(xì)胞庫。

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艾柏森生物使用MolecularClonePix2系統(tǒng),高通量、自動(dòng)化的篩選出100-200個(gè)高水平分泌克隆,并從中挑選最佳10-20個(gè)高產(chǎn)克隆,進(jìn)行下一步的穩(wěn)定性測(cè)試。我們挑選出*的10個(gè)克隆,進(jìn)行10次傳代后,qPCR和WB法檢測(cè)細(xì)胞株的穩(wěn)定性。我們提供序列及載體報(bào)告, 3株表達(dá)zuihao的細(xì)胞株,表達(dá)分析、穩(wěn)定性測(cè)試報(bào)告以及詳細(xì)的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建報(bào)告。




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