技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是一種對特定的靶核酸片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的方法,通常由變性—退火—延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成,通過不同溫度的循環(huán)實(shí)現(xiàn)靶核酸的擴(kuò)增。
實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸擴(kuò)增與實(shí)時(shí)檢測技術(shù),將熒光染料或熒光探針引入PCR反應(yīng)體系,利用每一溫度循環(huán)熒光信號的積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期,熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)反應(yīng)的循環(huán)數(shù)(Ct值)和被測模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系,因而可用來進(jìn)行定性及定量分析。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制,PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液,只要能分離出一丁點(diǎn)的DNA,就能用PCR加以放大,進(jìn)行比對。這也是“微量證據(jù)"的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設(shè)想,1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng),即簡易DNA擴(kuò)增法,意味著PCR技術(shù)的真正誕生。到如今2013年,PCR已發(fā)展到第三代技術(shù)。1976年,中國科學(xué)家錢嘉韻,發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶,為PCR技術(shù)發(fā)展也做出了基礎(chǔ)性貢獻(xiàn)。
PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈?;诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備,能在變性溫度,復(fù)性溫度,延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。
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