免疫原是單抗制備的關(guān)鍵要素，其選擇需依據(jù)目標(biāo)抗體的特異性和重要性。常用的免疫原包括蛋白質(zhì)、多肽、多糖、細(xì)胞表面分子等。為增強免疫原性，通常會將免疫原與佐劑混合，以提升其在免疫過程中的刺激效果。
 

　　動物免疫的目的在于使動物(如小鼠、大鼠等)產(chǎn)生針對目標(biāo)抗原的免疫反應(yīng)。將選定的免疫原與佐劑充分混合后，通過特定的注射途徑(如腹腔注射、皮下注射等)注入動物體內(nèi)。在初次免疫后的一段時間內(nèi)，還需進行多次加強免疫，以確保動物體內(nèi)能產(chǎn)生足夠數(shù)量和高親和力的特異性抗體分泌B細(xì)胞。
 

　　在動物免疫達(dá)到預(yù)期效果后，提取動物脾臟中的B淋巴細(xì)胞。這些B淋巴細(xì)胞能夠分泌針對目標(biāo)抗原的特異性抗體，但由于其本身不能在體外長期存活和增殖，需要與骨髓瘤細(xì)胞進行融合。骨髓瘤細(xì)胞具有無限增殖的特性，通過融合劑的作用，使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞。這種融合技術(shù)基于細(xì)胞膜的流動性和細(xì)胞的自我修復(fù)能力，形成的雜交瘤細(xì)胞既具備B淋巴細(xì)胞分泌特異性抗體的能力，又擁有骨髓瘤細(xì)胞的無限增殖特性。

 

　　單抗制備的注意事項：
 

　　1.儲存與運輸：
 

　　-單抗應(yīng)儲存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融；運輸時需保持低溫并避光。
 

　　-長期保存可添加BSA或甘油作為保護劑，防止蛋白變性。
 

　　2.操作規(guī)范：
 

　　-實驗過程中需嚴(yán)格無菌操作，避免微生物污染；使用一次性耗材減少交叉污染風(fēng)險。
 

　　-單抗稀釋時應(yīng)使用PBS或?qū)Ｓ孟♂屢?，避免使用含疊氮鈉(NaN3)的緩沖液。
 

　　3.安全性與倫理：
 

　　-動物實驗需遵循“替代、減少、優(yōu)化”原則，減少免疫動物的痛苦。
 

　　-臨床級單抗需通過病毒滅活和去除內(nèi)毒素處理，確保安全性。
 

　　4.應(yīng)用限制：
 

　　-單抗可能存在物種交叉反應(yīng)性差異，使用前需驗證其與目標(biāo)物種的兼容性。
 

　　-治療性單抗需監(jiān)測免疫原性(如HAMA反應(yīng))，避免引起人體免疫排斥。
 

　　5.質(zhì)量控制：
 

　　-每批單抗需進行效價、純度、活性等關(guān)鍵指標(biāo)的檢測，確保批次間一致性。
 

　　-腹水來源的單抗需去除雜蛋白(如小鼠IgG)，并通過親和層析純化。