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【干貨分享】關(guān)于大腸桿菌重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)解答

大腸桿菌（E.coli）重組蛋白表達(dá)技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展，相對(duì)于其他表達(dá)體系，算是非常成熟的一個(gè)體系。大腸桿菌蛋白表達(dá)系統(tǒng)主要有以下特點(diǎn)：遺傳背景清楚；易于培養(yǎng)和控制；轉(zhuǎn)化操作簡(jiǎn)單；表達(dá)水平高；成本低；周期短。本篇將對(duì)大腸桿菌重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)的常見技術(shù)問題進(jìn)行一一解答。1：大腸桿菌表達(dá)體系的優(yōu)點(diǎn)是什么？（1）菌體繁殖速度快：20分鐘倍增一次，這意味著按照1/100的比例接種（MOI），只需要幾個(gè)小時(shí)培養(yǎng)基細(xì)菌即可到達(dá)穩(wěn)定期；（2）容易實(shí)現(xiàn)高密度培養(yǎng)：理論培養(yǎng)密度是1×1013c...

【技術(shù)服務(wù)】常規(guī)小鼠源多克隆抗體定制服務(wù)

多克隆抗體血清制備抗體的產(chǎn)生，是圍繞B淋巴細(xì)胞的激活與分化為漿細(xì)胞進(jìn)行的。在shou次免疫過程中，抗原首先經(jīng)多種免疫相關(guān)淋巴或巨噬細(xì)胞吞噬充分暴露抗原，并將抗原呈遞給靜止B淋巴細(xì)胞，以使其活化，活化后的B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，也就是抗體的產(chǎn)生者。由于抗原的表面存在多種抗原識(shí)別決定簇，因此在經(jīng)過免疫相關(guān)細(xì)胞加工后，呈遞給B淋巴細(xì)胞的抗原決定簇也是多種多樣的,理論上,-個(gè)B淋巴細(xì)胞只接受-種抗原決定簇,產(chǎn)生-種對(duì)應(yīng)與之結(jié)合的抗體,多個(gè)B淋巴細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生多種識(shí)別抗原不同抗原決定簇(...

安諾倫代理品牌Lumiprobe——高品質(zhì)活性熒光染料供應(yīng)商

LumiprobeCorporation品牌logoLumiprobeCorporation是美國(guó)一家高品質(zhì)生物技術(shù)公司，專業(yè)提供分子生物學(xué)研究用的活性熒光染料。從2006年起，公司開始生產(chǎn)并銷售生命科學(xué)研究和診斷學(xué)應(yīng)用的優(yōu)質(zhì)化學(xué)藥品。主要產(chǎn)品有：活性染料（ReactiveDye）和SYBRGreenI染料，定制合成熒光雙標(biāo)記引物。產(chǎn)品主要應(yīng)用：點(diǎn)擊化學(xué)（CLickChemistry）、蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的雙向熒光差異凝膠電泳（2DDIGE）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（ReaLtim...

重組蛋白質(zhì)的表達(dá)、純化、復(fù)性和定量

按操作手冊(cè)進(jìn)行，具體步驟如下。一、重組蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達(dá)1.挑取轉(zhuǎn)化有質(zhì)粒的單菌落，接種于3ml選擇性LB液體培養(yǎng)基中，37oC，250rpm/min振搖培養(yǎng)過夜。2.次日將培養(yǎng)過夜的菌液500μl再接種于10ml（1:::20）選擇性LB液體培養(yǎng)基中，37oC，250rpm/min振搖培養(yǎng)至光密度（OD600=0.6）時(shí)，取1ml樣本作為誘導(dǎo)前標(biāo)本，10000g離心1min收集菌體沉淀，－20oC凍存?zhèn)溆谩?.加入1mol/LIPTG于菌液中，使IPTG終濃度為1mM，37o...

拿來吧你，拯救你的重組蛋白

重組蛋白是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA技術(shù)而獲得的蛋白質(zhì)。用于生產(chǎn)重組蛋白的宿主細(xì)胞主要是細(xì)菌（大腸桿菌）、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和酵母。重組蛋白已被廣泛應(yīng)用于蛋白結(jié)構(gòu)研究、免疫檢測(cè)試劑、重組蛋白藥物、診斷試劑開發(fā)、抗體藥物靶點(diǎn)、CAR-T細(xì)胞治療靶點(diǎn)、Fc受體、流感病毒蛋白和細(xì)胞因子等大多數(shù)熱門研究領(lǐng)域。那大家在進(jìn)行重組蛋白表達(dá)時(shí)不知道會(huì)不會(huì)糾結(jié)這些問題：該選擇什么表達(dá)系統(tǒng)？蛋白產(chǎn)量怎么才能有所提高？接下來帶你們了解一些常見的外源基因表達(dá)系統(tǒng)（包括原核、真核表達(dá)系統(tǒng)）以及一...

新手小白細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)

轉(zhuǎn)染可謂是做生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的大家經(jīng)常會(huì)考慮的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，大致原理也都是明白的。但是在實(shí)驗(yàn)時(shí)經(jīng)常會(huì)遇到轉(zhuǎn)染效率太低，以至于無法進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。到底轉(zhuǎn)染是什么呢？為什么轉(zhuǎn)染效率不高呢？其實(shí)轉(zhuǎn)染，就是在真核細(xì)胞里導(dǎo)入具有生物功能的核酸，并在細(xì)胞中維持其生物功能。轉(zhuǎn)染方法的選擇我們熟知且常用的轉(zhuǎn)染方法主要有物理介導(dǎo)，化學(xué)介導(dǎo)，生物介導(dǎo)。物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原...

安諾倫銷售代理Leading Biology產(chǎn)品試劑*......

BIRC8/ILP2Antibody(N-Terminus)|LBP65960|LeadingBiology品牌LeadingBiology貨號(hào)LBP65960產(chǎn)地美國(guó)價(jià)格面詢保存條件:存儲(chǔ)在2-8°C2周，長(zhǎng)期存儲(chǔ)20°C,防止凍融循環(huán)。英文名:BIRC81ILP2Antibody(N-Terminus)供應(yīng)商:安諾倫(北京)生物科技有限公司規(guī)格:50ug商品分類:多克隆抗體產(chǎn)品概述:ProtectsagainstapoptosismediatedbyBAX.靶點(diǎn)/蛋白:s...

技術(shù)服務(wù)|大鼠源單克隆抗體定制服務(wù)

單克隆抗體/雜交瘤細(xì)胞定制服務(wù)雜交瘤技術(shù)的基本原理是通過融合兩種細(xì)胞而同時(shí)保持兩者的主要特征。這兩種細(xì)胞分別是經(jīng)抗原免疫的免疫動(dòng)物脾細(xì)胞(如小鼠B淋巴細(xì)胞)和具有永生功能的腫瘤細(xì)胞(如小鼠骨髓瘤細(xì)胞)。被特異性抗原免疫的免疫動(dòng)物脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)的主要特征是它的抗體能夠分泌產(chǎn)生結(jié)合抗原特定位置(表位)的抗體,但其自身不能在體外連續(xù)培養(yǎng)，具有永生功能的腫瘤細(xì)胞(骨髓瘤細(xì)胞)則可在培養(yǎng)條件下無限分裂、增殖，即具有所謂永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只賄由一個(gè)B淋巴細(xì)胞與一個(gè)骨髓瘤...