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PRODUCTS CNTER當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心細(xì)胞生物學(xué)流式細(xì)胞術(shù)MTT實(shí)驗(yàn)
MTT是一種粉末狀化學(xué)試劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,中文為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,是一種黃顏色的染料。
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ARTICLESMTT是一種粉末狀化學(xué)試劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,中文為 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽,是一種黃顏色的染料。
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在540 或720nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
主要實(shí)驗(yàn)流程為:
1. 接種細(xì)胞:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板,每孔體積200ul。
2. 培養(yǎng)細(xì)胞:同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間)。
3. 呈色:培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.繼續(xù)孵育4 h,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對(duì)于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ulDMSO,振蕩10min,使結(jié)晶物充分融解。
4. 比色:選擇490nm波長(zhǎng),在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀上測(cè)定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。
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