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實驗室經(jīng)驗總結(jié)之： 蛋白質(zhì)相互作用幾種方法比較

當(dāng)回轉(zhuǎn)驗證后呈陽性結(jié)果，需要GST-PULLDOWN（非生理條件下的驗證，僅是體外驗證，）；如果想進一步確定結(jié)果，可以做CO-IP,（生理條件下的驗證，結(jié)果比較可靠）；IP與CO-IP的關(guān)系：IP就是用抗體把你要的蛋白免疫沉淀下來，然后去檢測它。例如蛋白A在細胞內(nèi)的蛋白量不同，或者有著不同的翻譯后修飾，這是可以用A蛋白的抗體+proreinAbeads來IP，從細胞中把A拉下,再用特異的抗體（如磷酸化，泛素化抗體）來檢測A的變化。co-ip的原理和IP是一樣的，但是它檢測的是...

艾柏森X-射線晶體學(xué)技術(shù)原理

技術(shù)介紹：X-射線分辨單克隆抗體-抗原復(fù)合物是分析單克隆抗體識別表位的zui可靠方法，該方法基于對單克隆抗體-抗原共晶體衍射的X-射線束的強度和角度測量，再用生物信息學(xué)的方法確定原子坐標，將復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)完整可視化?？乖砦环治鰧贵w人源化改造，抗體親和力提高，抗體穩(wěn)定性改造，發(fā)現(xiàn)新的功能表位，改變抗體特異性，設(shè)計新抗體，基于抗原－抗體相互作用的立體構(gòu)型設(shè)計新型功能分子改造抗體都很重要。應(yīng)用該方法首先需獲得純度較高的抗原、抗體，并使其相互作用形成共晶，但由于成本及技術(shù)要求較...

miRNA的檢測

miRNA的檢測Real-timePCR方法克服了由于miRNA分子太短（~22nt）帶來的定量最大難題而引入靶向特異性的反轉(zhuǎn)錄引物，該RT引物可以與成熟miRNA結(jié)合，形成反轉(zhuǎn)錄引物/成熟miRNA復(fù)合物，并在miRNA的5’末端延伸。這樣就得到一個較長的反轉(zhuǎn)錄擴增因子，為進一步做實時定量PCR提供了符合要求的摸板。檢測流程與原理：?客戶提供：提供樣品：請?zhí)峁┬迈r且足量的樣本，組織100~200mg，RNA模板/DNA模板5μg；提供信息：待測miRNA名稱；詳細的背景資料...

關(guān)于細胞自噬，這些你都知道嗎？

細胞自噬是指在自噬相關(guān)基因的調(diào)控下，利用溶酶體降解自身受損的細胞器及大分子物質(zhì)的過程，以此維持細胞自身的需要及細胞器的更新。一、細胞自噬的基本概念及特征1、自噬的過程細胞質(zhì)中的線粒體等細胞器首先被稱為“隔離膜”的囊泡所包被,這種“隔離膜”主要來自于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體;囊泡逐漸閉合最終形成雙層膜結(jié)構(gòu),即自噬體，其大小約為500nm左右，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等;自噬體的外膜與溶酶體融合形成降解自體吞噬泡；由溶酶體內(nèi)的酶降解自體吞噬泡...

蛋白定量有哪些方法？

蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標準品，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標準曲線，依據(jù)標準曲線計算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法筆者均有使用經(jīng)驗，相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時間，也無需配置反應(yīng)試劑，...

做實驗不會制備細胞爬片怎么行?

我們在做免疫熒光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測（TUNEL）時，免不了要制備細胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準性。今天，就教大家如何制備好的細胞爬片。一.實驗材料及試劑蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等；75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基（RPMI-1640*培養(yǎng)基）、胰酶等。二、實驗內(nèi)容爬片準備：1、24*24蓋玻片，剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養(yǎng)皿中爬片。2.蓋玻片泡酸過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸...

安諾倫銷售Agrisera品牌產(chǎn)品——植物抗體ling航者

Agrisera公司成立于1980年，位于瑞典，長期以來，公司致力于植物/環(huán)境科學(xué)研究中所需蛋白抗體研發(fā)與銷售，以專注于研發(fā)高品質(zhì)稀有單克隆及多克隆抗體而在業(yè)界有較高知ming度。其抗體主要涉及植物蛋白，Agrisera公司提供1000種用于植物和藻類細胞生物學(xué)研究的一抗，2000多種二抗。Agrisera公司提供的抗體分兩大類：植物及藻類的抗體，以及細菌、真菌、昆蟲、魚等動物類抗體。針對植物蛋白質(zhì)的保守氨基酸序列，Agirsera還du家開發(fā)了數(shù)十種通用抗體（globala...

快速抗體制備服務(wù)

抗體的產(chǎn)生，是圍繞B淋巴細胞的激活與分化為漿細胞進行的。在shou次免疫過程中，抗原首先經(jīng)多種兔疫相關(guān)淋巴或巨噬細胞吞噬充分暴露抗原,并將抗原呈遞給靜止B淋巴細胞，以使其活化，活化后的B淋巴細胞轉(zhuǎn)化為漿細胞，也就是抗體的產(chǎn)生者。由于抗原的表面存在多種抗原識別決定簇，因此在經(jīng)過免疫相關(guān)細胞加工后，呈遞給B淋巴細胞的抗原決定簇也是多種多樣的，理論上，一個B淋巴細胞只接受-種抗原決定簇，產(chǎn)生-種對應(yīng)與之結(jié)合的抗體，多個B淋巴細胞就會產(chǎn)生多種識別抗原不同抗原決定簇(也就是表位)的抗體...