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miRNA的檢測(cè)

miRNA的檢測(cè)Real-timePCR方法克服了由于miRNA分子太短（~22nt）帶來的定量最大難題而引入靶向特異性的反轉(zhuǎn)錄引物，該RT引物可以與成熟miRNA結(jié)合，形成反轉(zhuǎn)錄引物/成熟miRNA復(fù)合物，并在miRNA的5’末端延伸。這樣就得到一個(gè)較長(zhǎng)的反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增因子，為進(jìn)一步做實(shí)時(shí)定量PCR提供了符合要求的摸板。檢測(cè)流程與原理：?客戶提供：提供樣品：請(qǐng)?zhí)峁┬迈r且足量的樣本，組織100~200mg，RNA模板/DNA模板5μg；提供信息：待測(cè)miRNA名稱；詳細(xì)的背景資料...

關(guān)于細(xì)胞自噬，這些你都知道嗎？

細(xì)胞自噬是指在自噬相關(guān)基因的調(diào)控下，利用溶酶體降解自身受損的細(xì)胞器及大分子物質(zhì)的過程，以此維持細(xì)胞自身的需要及細(xì)胞器的更新。一、細(xì)胞自噬的基本概念及特征1、自噬的過程細(xì)胞質(zhì)中的線粒體等細(xì)胞器首先被稱為“隔離膜”的囊泡所包被,這種“隔離膜”主要來自于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體;囊泡逐漸閉合最終形成雙層膜結(jié)構(gòu),即自噬體，其大小約為500nm左右，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等;自噬體的外膜與溶酶體融合形成降解自體吞噬泡；由溶酶體內(nèi)的酶降解自體吞噬泡...

蛋白定量有哪些方法？

蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測(cè)法和Bradford蛋白定量檢測(cè)法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測(cè)方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時(shí)間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算WB蛋白的濃度。兩種檢測(cè)方法筆者均有使用經(jīng)驗(yàn)，相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，也無需配置反應(yīng)試劑，...

做實(shí)驗(yàn)不會(huì)制備細(xì)胞爬片怎么行?

我們?cè)谧雒庖邿晒猓↖F），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測(cè)（TUNEL）時(shí)，免不了要制備細(xì)胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。今天，就教大家如何制備好的細(xì)胞爬片。一.實(shí)驗(yàn)材料及試劑蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等；75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基（RPMI-1640*培養(yǎng)基）、胰酶等。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容爬片準(zhǔn)備：1、24*24蓋玻片，剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養(yǎng)皿中爬片。2.蓋玻片泡酸過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸...

安諾倫銷售Agrisera品牌產(chǎn)品——植物抗體ling航者

Agrisera公司成立于1980年，位于瑞典，長(zhǎng)期以來，公司致力于植物/環(huán)境科學(xué)研究中所需蛋白抗體研發(fā)與銷售，以專注于研發(fā)高品質(zhì)稀有單克隆及多克隆抗體而在業(yè)界有較高知ming度。其抗體主要涉及植物蛋白，Agrisera公司提供1000種用于植物和藻類細(xì)胞生物學(xué)研究的一抗，2000多種二抗。Agrisera公司提供的抗體分兩大類：植物及藻類的抗體，以及細(xì)菌、真菌、昆蟲、魚等動(dòng)物類抗體。針對(duì)植物蛋白質(zhì)的保守氨基酸序列，Agirsera還du家開發(fā)了數(shù)十種通用抗體（globala...

快速抗體制備服務(wù)

抗體的產(chǎn)生，是圍繞B淋巴細(xì)胞的激活與分化為漿細(xì)胞進(jìn)行的。在shou次免疫過程中，抗原首先經(jīng)多種兔疫相關(guān)淋巴或巨噬細(xì)胞吞噬充分暴露抗原,并將抗原呈遞給靜止B淋巴細(xì)胞，以使其活化，活化后的B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，也就是抗體的產(chǎn)生者。由于抗原的表面存在多種抗原識(shí)別決定簇，因此在經(jīng)過免疫相關(guān)細(xì)胞加工后，呈遞給B淋巴細(xì)胞的抗原決定簇也是多種多樣的，理論上，一個(gè)B淋巴細(xì)胞只接受-種抗原決定簇，產(chǎn)生-種對(duì)應(yīng)與之結(jié)合的抗體，多個(gè)B淋巴細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生多種識(shí)別抗原不同抗原決定簇(也就是表位)的抗體...

質(zhì)粒DNA提取實(shí)驗(yàn)

在我們的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)用到質(zhì)粒DNA，那么具體是怎么來的呢？今天講的是DNA的提取步驟。前提：細(xì)菌繁殖步驟（挑單克隆，置于LB培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫?fù)u床搖過夜，180-200rpm）。一般市面上有很多試劑盒可供大家使用，大體步驟都差不多的啦~~我按照我所使用的試劑盒（AxyPrep中抽試劑盒）的步驟分享如下：收集1.50ml離心管收集過夜搖菌的LB培養(yǎng)液（此時(shí)可以做一下判斷，如果液體未變渾濁，說明細(xì)菌并未繁殖成功，這樣肯定難以提出DNA；如果液體渾濁，便說明細(xì)菌繁殖成功啦...

常見問題之蛋白在真核細(xì)胞的表達(dá)量低？

實(shí)際上真核生物的蛋白也可以用真核細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)，而且效果往往更好。用原核生物來表達(dá)主要還是因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，快速。如果希望表達(dá)和純化的蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)原核系統(tǒng)表達(dá)之后仍然有正確的折疊構(gòu)象，那么使用原核表達(dá)系統(tǒng)就很合適了。有的時(shí)候在不同的表達(dá)體系里面對(duì)蛋白的表達(dá)量是有影響的。當(dāng)構(gòu)建完成后攜帶有信號(hào)肽的時(shí)候，一些蛋白在真核表達(dá)體系中表達(dá)量極低。去除信號(hào)肽序列值后，直接表達(dá)成熟肽，表達(dá)水平明顯提高。所以說構(gòu)建的真核表達(dá)載體高表達(dá)mRNA卻檢測(cè)不到目的蛋白是*有可能的。