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ARTICLES目前,藥用抗體的研發(fā)主要基于雜交瘤細(xì)胞或者體外抗體庫。通過抗原設(shè)計和抗體篩選,人們初步獲得陽性的hits,再進(jìn)一步通過一系列生物性質(zhì)檢測和功能驗證,終得到有藥用潛力的抗體。在實際研發(fā)過程中,經(jīng)過了常規(guī)篩選所得的抗體,有諸多方面需要更細(xì)致的改進(jìn),包括親和力、免疫原性、半衰期等等,抗體領(lǐng)域這些年來做了很多相關(guān)的研究和實踐。其中,抗體親和力成熟是研究的重要方向之一。
抗體在分子生物學(xué)實驗中的應(yīng)用,隨著分子生物學(xué)發(fā)展的進(jìn)步而越來越成熟,而抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進(jìn)化的結(jié)果,在眾多物種中,抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域)以beta的片層(beta-sheet)形式堆疊,形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治”結(jié)構(gòu),輕鏈和重鏈通過保守的二硫鍵形成具有三個結(jié)構(gòu)域的免疫球蛋白,大大提高了分子本身的穩(wěn)定性。
單鏈抗體(single-chian variable fragment,scFv),是由抗體重鏈的可變區(qū)與輕鏈的可變區(qū)在一段肽鏈連接下構(gòu)成的小分子,是具有抗體活性的小結(jié)構(gòu)功能結(jié)構(gòu)單位;單鏈抗體可以由表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá),也可以用噬菌體展示技術(shù)進(jìn)行制備,由于其分子量小,穿透力強(qiáng),半衰期短,免于抗原性低等等特點(diǎn),所以在臨床診斷,治療,預(yù)防方面有重要作用和廣闊的應(yīng)用前景,本文就單鏈抗體結(jié)構(gòu),制備,應(yīng)用等方
人-鼠嵌合抗體:利用DNA重組技術(shù)將鼠源單抗的輕鏈、重鏈可變區(qū)插入含有人抗體恒定區(qū)的表達(dá)載體中,轉(zhuǎn)化哺乳動物細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)所產(chǎn)生的單克隆抗體。人-鼠嵌合抗體的人源化程度可達(dá)到70%,完整的保留了鼠源單抗的可變區(qū),大限度的保留了親本活性,人抗體恒定區(qū)的引入則大大降低了免疫原性。
雙特異性抗體(bispecific antibody,BsAb),擁有兩個不同的抗原結(jié)合位點(diǎn),從而同時與兩個靶抗原結(jié)合,在發(fā)揮抗體靶向性的同時,介導(dǎo)另外一種特殊的功能,例如一個結(jié)合靶細(xì)胞上的特異抗原,另一個結(jié)合淋巴細(xì)胞或者吞噬細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞,從而在腫瘤診斷及治療過程中發(fā)揮傳統(tǒng)抗體*的優(yōu)勢。雙特異性抗體結(jié)合抗原的兩條臂可分別來自Fab、Fv、ScFv或者dSFv等,一般是雙價的,有時候也可以構(gòu)
蛋白質(zhì)藥物,包括單克隆抗體,越來越多的被開發(fā)用于糖尿病、癌癥等疾病的診斷和治療,且治療效果優(yōu)于多數(shù)其他小分子藥物,具有高度的特異性和較少的副作用。當(dāng)前技術(shù)生產(chǎn)的蛋白質(zhì)藥物的終產(chǎn)品因在不同的生產(chǎn)階段會發(fā)生各種各樣的修飾改變,都存在異構(gòu)性問題。因此,對蛋白藥物進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定對其可再生及安全生產(chǎn)是十分必要的。
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